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慢病毒包装rev-慢病毒包装步骤

慢病毒包装rev-慢病毒包装步骤

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  1. 慢病毒包装的原理
  2. 包装反转录病毒(如慢病毒)时采用多质粒系统共转染细胞,那么包转好的...
  3. 慢病毒包装的简要流程
  4. ...慢病毒包装时三个关键基因gag/pol,VSV-G,REV分别是干什么用的?_百...

1、慢病毒包装的原理

病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列、shRNA或gRNA)导入动物和人的原代细胞或细胞系。

原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。

慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。

2、包装反转录病毒(如慢病毒)时采用多质粒系统共转染细胞,那么包转好的...

病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。

慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。

无需任何转染试剂,操作简便。5) 可以根据客户需要制备多种标记。慢病毒包装简要流程:1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。

3、慢病毒包装的简要流程

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。

慢病毒包装简要流程:1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3) 培养 48hrs – 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。

慢病毒包装简介及其用途 慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。

慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。

4、...慢病毒包装时三个关键基因gag/pol,VSV-G,REV分别是干什么用的?_百...

多质粒系统指的是慢病毒的包装系统,就三质粒(包装质粒、包膜蛋白质粒、转移质粒)包装系统来说,病毒包装必需的3个蛋白Gag/Pol、Rev、VSV-G分别放置在不同的质粒上,且互相之间没有任何同源序列,就是为了不使其进行重组。

包膜蛋白 病毒载体可以借助其他病原体的外壳蛋白包装成假病毒,以改变其嗜性。最常用的是疱疹性口腔炎病毒膜融合包膜G糖蛋白(VSV-G) 。

慢病毒属于逆转录病毒科,但其基因组结构复杂,除 gag、pol 和 env 这 3 个和单纯逆转录病毒相似的结构基因外,还包括 4 个辅助基因,vif、vpr、nef、vpu 和 2 个调节基因 tat 和 rev 。

限制作用是否需用 ATP No Yes Yes 限制酶识别的序列 限制酶识别序列的长度 限制酶识别序列的长度一般为 4-8 个碱基,最常见的为 6 个碱基(表2-3)。

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