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1. 已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株

1、已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株

稳转细胞株构建步骤： 严格细胞检测，确保细胞健康无污染。 精心设计慢病毒包装，包括穿梭质粒、包装质粒和包膜质粒，转染293T细胞，浓缩并筛选病毒。 病毒转导细胞，通过荧光标记筛选，并在一定时间后进行抗性筛选。

构建方法：先把质粒整合到染色体上后，用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系，就行成了稳定表达的细胞株。细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。

可以使用多种转染方法，如化学法、电穿孔法、病毒载体介导转染等。选择筛选：在转染后添加相应的选择压（例如抗生素），以筛选出已成功集成表达载体的细胞。通常会对细胞进行适当的稀释，以确保每个克隆细胞单元可以正常生长。

因此，本文将重点介绍利用质粒转染构建细胞稳转株的方法。 选择合适的细胞系 在开始构建稳定细胞株之前，需要选择合适的细胞系。一般来说，常用的细胞系有29HeLa和CHO等。

细胞粘附在壁上后，添加抗生素进行筛选。筛选时间和浓度取决于细胞。通常，G418 生效一周，嘌呤 2－3 天。脂质体单克隆的筛选时间长且效率低，仅约 1％。

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