大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于mirna能构建载体吗的问题，于是小编就整理了1个相关介绍mirna能构建载体吗的解答，让我们一起看看吧。

1. 如何构建miRNA的表达载体

1、如何构建miRNA的表达载体

将目的基因3’UTR区域或者lncRNA序列构建至载体中报告基因Luciferase的后面，构建荧光素酶质粒。

稳定的细胞系必须小心地建立，采用病毒滴度测定来避免上述问题。Joshua Mendell（约翰霍普金斯大学）对于miRNA的上调，我们常常构建表达载体。制备起来非常简单。我们只是扩增miRNA发夹结构及一些侧翼序列，并直接克隆PCR产物。

双荧光素酶报告基因系统：该方法通过构建含有miRNA靶标位点的Luciferase报告基因载体，并将其转染至细胞中，然后共转染miRNA和Luciferase报告基因载体。

我们在玉米（Zea）RNA载体背景中加入合成的成熟miRNA（IDT）来验证。就northern来说，每个miRNA家族成员的合成miRNA在含有8M尿素的15% PAGE胶上进行。优化杂交温度，让LNA探针只与目的miRNA结合，而不与其它成员结合。

c）miRNA-mRNA双链之间的热稳定性；（d）miRNA靶位点不会有复杂的二级结构；（e）miRNA 5’端于靶基因的结合能力强于3’端。除了这些基本原则以外，不同的预测方法还会根据各自总结的规律对算法进行限制和优化。

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