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1. 质粒作为载体必须具备的条件
2. 同源重组构建质粒原理
3. 载体构建的原理及方法
4. 结合PBR322质粒载体构建过程,总结质粒载体的特点和质粒载体构建的...

1、质粒作为载体必须具备的条件

质粒作为载体的条件有：具有复制起始点。具有两种以上易被检测的选择性标记。在选择标记上具有多种限制酶的单一切点。具有尽可能小的相对分子质量。应属于松弛复制型。应为非传递性质粒理想值粒载体例子。

质粒作为载体必须具备的条件：多个酶切位点、对受体细胞没有危害并易于分离、能自我复制并稳定保存、具有特殊的标记基因，质粒广泛存在于生物界，从细菌、放线菌、丝状真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人类机体中都含有。

用于基因无性繁殖，质粒载体至少需要具备哪些条件 用于克隆表达的质粒载体通常涉及的三要素：1．复制子：又称复制起始区，包含控制质粒DNA复制起点和质粒拷贝数等遗传因素。复制子可分为为：①严谨型复制子②松弛型复制子。

一般载体所具备的基本条件为：能自我复制，并具有一定的拷贝数；带有抗性基因，便于筛选和鉴定；在适当的位置有单酶切位点；带有强启动子，驱动目的基因在宿主细胞内高效表达。

用人工方法取得目的基因的适宜载体，即质粒（一种环状双链DNA）或病毒。

2、同源重组构建质粒原理

同源基因编辑原理：CRISPR/Cas9系统是一种原核生物的免疫系统，是细菌用来抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制。

那就要看是什么菌种的，有些菌种是重组酶缺陷的，比如TOPstbl3等等，有些菌种表达重组酶，只要有同源序列，就容易发生重组。你要好好看看菌种的说明书，看看是不是重组缺陷的。

在同源重组构建质粒中，外源DNA序列与质粒DNA序列具有相同的序列段，可以通过该序列段实现重组。筛选带有外源DNA序列的质粒：为了筛选带有外源DNA序列的质粒，通常会在质粒中加入选择标记，例如抗生素抗性基因。

需要。根据个人图书馆中的相关信息，同源重组克隆技术在进行TA克隆构建重组质粒时，需要考虑外源片段上是否有需要用到的酶切位点，是否会发生移码，如果有就无法正确的构建重组质粒。

最后将载体和目的基因链接，构建重组质粒。设计引物，自带酶切位点，扩增目的基因，直接改变目的基因的酶切位点，然后再用和载体相同的限制酶酶切目的基因，切出相同的粘性末端。直接将酶切完成的目的基因和载体连接。

3、载体构建的原理及方法

原理步骤如下：载体构建的原理：载体构建是指将外源DNA片段导入到特定的载体中，以便将其传递到目标细胞中。常用的载体是质粒，其具有自主复制和传递的能力。

设计引物加接头，扩增目的基因，连接到T载体上测序。

原理：将外源基因片段与载体连接（载体通常选用质粒或者噬菌体或其他病毒），将重组的载体转染受体细胞，使之整合入宿主基因组或者在稳定存在于胞质内，是宿主细胞能够表达载体上的外源基因，从而获得新性状或者新产物。

载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

4、结合PBR322质粒载体构建过程,总结质粒载体的特点和质粒载体构建的...

质粒载体的四个基本特征 质粒载体具有独立复制的能力。质粒载体具有选择标记。质粒载体具有独特的酶切位点。质粒载体能够转化但是不扩散。

酵母质粒载体都是利用酵母的2μm质粒和其染色体组分与细菌质粒pBR322构建而成的，能分别在细菌和酵母菌中进行复制，所以又称为穿梭载体。

如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。

质粒 常用的有pBR322，pUC系列质粒等。（一）pBR322质粒是4362bp的环状双链DNA载体，有2个抗药性基因（四环素和氨苄青霉素），一个复制起始点和多个用于克隆 的限制酶切点。

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