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1. 慢病毒与腺病毒的比较
2. 慢病毒载体可以使用DH5α感受态细胞吗
3. 慢病毒包装的原理
4. pcdna3.1质粒能包装慢病毒吗
5. 病毒包装-慢病毒

1、慢病毒与腺病毒的比较

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种（单链RNA病毒）。

真核表达载体包括腺病毒载体和慢病毒载体，在真核细胞内用于表达目的蛋白的载体都可以叫做真核载体。腺病毒载体携带外源基因较大，可瞬时高表达。慢病毒载体携带外源基因较小些，但可以重组入细胞基因组，稳定高表达。

慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些，所以应用较多。

不同血清型可以相对特异性的感染心脏，肝脏，骨骼肌等。腺相关病毒是RG1（最安全级别）的基因治疗载体，完全无具有潜在致病性。而腺病毒是RG2，慢病毒是RG2，逆转录病毒是RG3 。

腺病毒的感染大多是由于以下途径导致的飞沫传染：导致呼吸道感染症状的血清型通常会经由飞沫传染。粪口传染：因为腺病毒家族有感染肠道细胞的倾向，所以有时可能透过污染的水、食物而感染。

2、慢病毒载体可以使用DH5α感受态细胞吗

不好意思，之前弄错了，可以的。慢病毒载体可以重组，所以要选用重组缺陷的菌。DH5α或JM109，XL1-blue菌株为重组缺陷性菌株，可稳定扩增已鉴定的重组质粒。

DH5α：常用于质粒克隆，可用于蓝白斑筛选TOP10：适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能够保证高拷贝质粒的稳定遗传。TG1： 生长速度快，常用于噬菌体的制备，同时也可用于普通质粒的构建。CopyCutter：适用于有毒克隆。

If you were unable to measure the DNA concentration， use 1 μL） 双酶切载体质粒要测浓度，再算体积。 16°C孵育4-20h。从-80℃冰箱取出DH5α感受态菌100ul（一般用20ul即可），立即放冰上缓慢溶解10min。

我们以pGreenPuro为例说明慢病毒表达载体中一些关键的功能元件（图13，表5）。（6）感受态细胞 感受态细胞是采用理化方法诱导过的细胞，它可以吸收周围环境中的DNA分子。

3、慢病毒包装的原理

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒载体（Lentiviral vector， LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（蛋白质编码序列、shRNA或gRNA）导入动物和人的原代细胞或细胞系。

原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

4、pcdna3.1质粒能包装慢病毒吗

而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。

慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第2次注射。

就以慢病毒为例。包装好的病毒只含有结构质粒5；LTR和3；LTR之间的RNA序列。

含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。5）分装、-80℃保存。

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

5、病毒包装-慢病毒

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第2次注射。

慢病毒包装简介及其用途 慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

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