蛋白质组学检测手段-蛋白质组学检测方法

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蛋白表达水平的检测方法有多种，常用的几种包括：免疫印迹法（WB）：通过将蛋白质样品进行电泳分离，然后将其转移到膜上，并利用特异性抗体与目标蛋白结合形成复合物，最后使用化学发光或染色方法检测复合物的存在和相对丰度。

有三种，第一是用DNA探针检测，看目的基因是否存在。第二种是用mRNA做探针，看是否有由DNA转录形成的mRNA，原理和前面是一样的，利用碱基互补配对原则。前面两种都是在分子水平检测，第三种是在个体水平直接检测的。

双缩脲试剂检测准备双缩脲试剂和待测样品。将双缩脲试剂A液和B液混合均匀。加入待测样品至双缩脲试剂中，充分混合。观察颜色变化，如果产生紫色反应，则说明样品中含有蛋白质。

要比较7种细胞中所表达的蛋白质的差异，你可以采用以下方法：二维电泳（2-DE）：使用二维电泳可以将细胞的蛋白质按照等电点和分子量进行分离。不同细胞类型的2-DE图谱会展现出不同的蛋白质斑点模式。

原始样品可为细胞、组织、培养上清、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白，以下为定性检测目的蛋白时细胞样品的处理方法，其余的样品制备方法参阅相关文献。培养细胞或药物处理。弃培养基，用1X PBS漂洗细胞2次，去尽残留培养基。

蛋白质组学的研究方法有蛋白质鉴定、翻译后修饰、蛋白质功能确定、蛋白质靶向定量技术。蛋白质鉴定：可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术，利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。

蛋白质组的研究实质上是在细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离和分析，往往要同时处理成千上万种蛋白质。因此，发展高通量、高灵敏度、高准确性的研究技术平台是现在乃至相当一段时间内蛋白质组学研究中的主要任务。

四定量蛋白质组学方法：⑴ ICAT（isotope-coded affinity tags）方法。ICAT是用于定量蛋白质组学研究的稳定同位素标签法的一种。

蛋白质组学一经出现，就有两种研究策略。一种可称为“竭泽法”，即采用高通量的蛋白质组研究技术分析生物体内尽可能多乃至接近所有的蛋白质，这种观点从大规模、系统性的角度来看待蛋白质组学，也更符合蛋白质组学的本质。

Genomic Solution可以为研究者提供除质谱外的所有蛋白质组学研究工具，包括二维电泳系统，成像系统及分析软件，胶切割系统，蛋白质消化浓缩工作站，点样工作站等；同时还可以提供相关试剂和消耗品。

以肝毒性为例，蛋白质组学可以为药物研发前期的肝毒性评估提供研究手段。

蛋白质组学有多种分离技术，但没有好坏之分，只有适合不适合。双向电泳是比较传统的分离技术，优点就是相对便宜，而且结果比较可靠（如果有很好的重复性的话）。缺点就是分辨率低，丰度很小的蛋白无法检测到。

核酸排序就是ATGC的各种组合，但是蛋白质组学涉及的常用氨基酸就有20多种，这个排序下来复杂度高多了，蛋白还存在各种翻译后修饰，高级结构等等。而且蛋白质没有核酸稳定，容易降解，研究起来更难获得重复性好的结果。

利用如STRING、BioGRID等数据库，构建蛋白质之间的相互作用网络。（2）识别关键蛋白或亚网络，它们可能在疾病或特定生物过程中起到中心作用。验证：使用西方印迹、免疫荧光等技术，对筛选出的关键差异蛋白进行实验验证。

在应用2D-PAGE研究差异蛋白质组学问题时首先要获得要进行差异比较的组织，如肿瘤组织与癌旁正常组织，然后裂解组织和细胞，抑制蛋白酶活性，出去非蛋白质的DNA，RNA，脂类等物质，溶解蛋白质，溶解并抽提总蛋白质。

先进行等电聚焦电泳（按照蛋白等电点pI分离）：在胶中加入双性电解质溶液，加上电场后建立稳定PH梯度，蛋白质溶液加入后建立电场，蛋白以不同PI分离开来。

蛋白质图像的差异对比分析：给予双向电泳所获得的凝胶图谱，可用图像分析软件进行分析对比。差异蛋白质肽段鉴定：图像分析显示的不相匹配点及有异常变化匹配点是比较蛋白质组学的兴趣所在。

发现蛋白质组学和靶向蛋白质组学：前者更关注蛋白质筛选和动力学，后者更侧重于检测目标蛋白质或多肽以实现绝对定量。

到此，以上就是小编对于蛋白质组学检测手段的问题就介绍到这了，希望介绍关于蛋白质组学检测手段的4点解答对大家有用。

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