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细胞膜分离纯化-细胞膜分离纯化原理

细胞膜分离纯化-细胞膜分离纯化原理

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  1. 制备纯净的细胞膜用什么材料
  2. 细胞破裂后还需用什么方法才能获得较纯的细胞膜
  3. 如何提取细胞膜(动物细胞)上的蛋白质
  4. 如何分离大鼠红细胞的细胞膜
  5. 需要用什么方法才能获得较纯的细胞膜

1、制备纯净的细胞膜用什么材料

操作指南:1.材料 新鲜的哺乳动物血液。2.用具 离心机,离心管,滴管,显微镜,载玻片,盖玻片,吸水纸,小烧杯。3.试剂 柠檬酸钠或肝素(抗凝剂),生理盐水(质量分数为0.9%的NaCl溶液),蒸馏水或清水。

制备细胞膜时,选哺乳动物成熟的红细胞作实验材料的原因:动物细胞没有细胞壁,不但省去了去除细胞壁的麻烦,而且无细胞壁的支持、保护,细胞易吸水涨破。

磷脂 磷脂是细胞膜的主要组成部分,也是细胞膜的主要结构材料。磷脂分子由一个疏水性的脂肪酸尾部和一个亲水性的磷酸头部组成。这种结构使得磷脂分子能够在水中形成双层结构,其中疏水性尾部相互靠近,而亲复制全文向水。

制备细胞膜的材料是哺乳动物成熟的红细胞。红细胞或红血球,在常规化验中英文常缩写为RBC,是血液中为数最多的一类血细胞,同时也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介,同时还存在免疫功能。

2、细胞破裂后还需用什么方法才能获得较纯的细胞膜

酶解法 用胶原酶/EDTA 释放细胞 是用硅胶包裹住细胞,然后使用酶裂解细胞,使细胞释放内容物,然后使用差速离心,由于细胞膜上附着这硅胶,密度较大,会沉到试管最底部。取出后使用Nycodenz70%沉淀,最后得到细胞膜。

CO2/O2交换蛋白等,所以整个膜的重量要比血红蛋白重的多,在下层就是胀破后的细胞膜,俗称“血影”。要指出的是细胞膜破碎后并不是成一块块很小的碎片,而是有一个或两个漏洞而已,就整个细胞膜而言还是很完整的。

制备细胞膜的方法是先将细胞破裂,然后采用差速离心的方法得到较纯净的细胞膜。

3、如何提取细胞膜(动物细胞)上的蛋白质

机械破碎法(匀浆)1 利用机械力将细胞破碎。常用的设备:高速组织捣碎机,匀浆器,研钵等。不同组织的特性来选择不同的方法,动物的胰肝脑一般较柔软,用普通匀浆器研磨即可,而肌及心肌组织较韧,需预先搅碎成匀浆。

如果碰上所要蛋白是与细胞膜或膜质细胞器结合的,则必须利用超声波或去污剂使膜结构解聚,然后用适当介质提取。

食物中的蛋白质经消化变成变成氨基酸后经吸收运输进入细胞。膜蛋白的编码在细胞核中(DNA)经转录生成mRNA,在细胞质的核糖体中合成蛋白质(由tRNA运载的氨基酸为原料,以mRNA为模板)。

破碎细胞 超声或研磨破碎细胞使蛋白质释出,将组织液离心,去除细胞膜等碎片沉淀。盐析 过滤后的组织液加较高浓度的盐(一般用硫酸铵),蛋白质析出沉淀,过滤取沉淀,沉淀加水再溶解。

向提取细胞膜中加双缩脲试剂,会与蛋白质发生紫色反应;用蛋白酶处理提取的细胞膜,膜会被破坏。证明膜上具有蛋白质。

4、如何分离大鼠红细胞的细胞膜

第一种方法:吸水胀破法!将红细胞放入无菌水中,然后用差速离心机离心机离心直至混合液分为均匀的几层。然后取最下面一层即可。

手头没啥直接泡水里就行,会涨漏。想要膜蛋白可以用去垢剂,TritonX-100之类的。要是不要求蛋白活性保持,加SDS吧,如果懒得去化学药品店,洗洁精里也有那玩意儿。其实用两片光滑的载玻片也可以直接压扁...膜就破了。

滴管,吸水纸,玻片,盖玻片,显微镜 。实验原理 1.哺乳动物的红细胞只有细胞膜一种膜结构吸水。 2.红细胞在蒸馏水中吸水胀破。 实验过程 1.稀释:向新鲜的猪血中加适量的生理盐水。 2.制片:用滴管吸取少量红细。

从哺乳动物的红细胞中分离细胞膜,第一步是将血液收集在加有抗凝剂的容器内,用低速离心的方法从血液中分离出红细胞,然后用等渗缓冲液反复洗涤,经多次离心,去除血浆。

5、需要用什么方法才能获得较纯的细胞膜

倒入水中,让细胞吸水胀破 然后离心,取上层清液过滤,就能得到细胞膜 哺乳动物成熟的红细胞内只有血红蛋白,无核无细胞器,细胞膜主要成分是磷脂,质量分数比蛋白质小,离心后会分层,细胞膜处于上层清液中。

用离心法,沉淀物中含细胞膜,上层清液是血红蛋白溶液。

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