大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建载体做PCR验证的问题，于是小编就整理了1个相关介绍构建载体做PCR验证的解答，让我们一起看看吧。

1. ...但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因?

1、...但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因?

第一个办法 ，如果你有这个载体的通用引物，可以用这俩通用引物做PCR，然后电泳观察条带的大小，如果条带和你的mRNA的大小相近（应该是略大于mRNA的，因为带有了小部分的载体序列），那就说明这里边是插入目的基因的。

mRNA一般使用RT-qPCR进行“定量”PCR。步骤前三步同于“半定量”PCR，第四步PCR的时候，用的PCR试剂，必须带有荧光素，用实时定量PCR仪检测。通过数据分析，得到mRNA的含量。

直接测定：按照目的基因组成制作DNA分子探针进行配对。mRNA测定：根据目的基因组得出其转录的mRNA组成，利用探针检测。蛋白测定：可应用PCR相应技术测定目的基因翻译的相关蛋白，也可采用免疫化学法导入蛋白抗体检测蛋白。

获取目的基因，要知道转录版本全长，然后设计上下游引物。检测目的基因表达，只要设计上下游引物，扩增基因的100--200个碱基就可以了。或者你的提问本身有问题，基因碱基是互补的，知道一条，就可以设计上下游引物。

先提取RNA，反转录成cDNA，然后根据目的基因设计PCR引物，通过半定量RT-PCR确定目的基因表达。正因为检测的是mRNA，所以要先反转录成cDNA才能PCR。

到此，以上就是小编对于构建载体做PCR验证的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建载体做PCR验证的1点解答对大家有用。